ВПЧ типы 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 70 без определения типа, количественный анализ

Метод исследования: ПЦР

Биоматериал: соскоб с шейки матки

Преимущества теста:

− типы ВПЧ, предлагаемые для тестирования, относятся к спектру

высококанцерогенных вирусов;

− диагностическая чувствительность теста определяется одиннадцатью

выявляемыми генотипами;

− тест позволяет определять количество копий вирусной ДНК в стандартном

количестве эпителиальных клеток, учитывая, что ВПЧ является

внутриклеточным паразитом.

Определение вирусной нагрузки является принципиально новым подходом в

диагностике ВПЧ-инфекции. Применяемый при скрининговых исследованиях тест «HPV

Digene-test» не дает возможность определять истинную концентрацию вируса в образце.

Результаты предлагаются в условных единицах хемилюминисценции, которые нельзя

перевести в копии ДНК ВПЧ. «HPV Digene-test» дает возможность лишь отделить клинически

значимую вирусную нагрузку от незначимой. Низкие количества ДНК вируса (менее 105 копий

ДНК вируса на соскоб) остаются ниже порога чувствительности тест-системы.

Исследование, предлагаемое лабораторией ДНК Диагностика позволяет:

− Контролировать адекватность забора материала по наличию в образце достаточного

количества эпителиальных клеток, что обеспечивает высокую чувствительность и

специфичность теста.

− Определять к какой филогенетической группе ВПЧ относится вирус. Группа A9

включает 16, 31, 33, 35, 52, 58 типы, А7 - включает 18, 39, 45, 59 типы, А5 - 51 тип, А6

- 56 тип. Разделение по группам важно для динамического наблюдения за вирусной

инфекцией и более точного прогнозирования ее развития, т.к. разные типы ВПЧ

обладают разным онкогенным потенциалом, а также способностью к персистенции.

Например, 51 и 56 типы ВПЧ являются наименее канцерогенными и более эффективно

элиминируются из организма.

− Определять раздельно концентрацию ВПЧ в филогенетических группах. По

результатам исследований проводимых в последние годы, концентрация ВПЧ,

клинически значимая для одних типов, является клинически незначимой для других.

Алгоритм диагностики с использованием теста ДНК ВПЧ

Показания к назначению теста:

− В качестве первичного скринингового метода перед проведением цитологического

исследования или одновременно с ним для женщин старше 25-30 лет.

− Для контролирования эффективности терапии предраковой патологии шейки матки.

Материал для исследования и правила забора:

− материалом является соскоб с поверхности шейки матки (эктоцервикс) и

эпителиальных клеток из цервикального канала (эндоцервикс).

Забор производится в одноразовые пробирки типа «Эппендорф» со специальной

транспортной средой для клинического материала из урогенитального тракта женщин розового

цвета.

Первый способ (используется две цитощетки):

Стерильным тампоном удаляют слизь с поверхности шейки матки. Вводят первую

цитощетку в цервикальный канал (эндоцервикс) и делают два полных оборота в одну и в другую

сторону. Извлекают щетку, избегая касания стенок влагалища, и помещают в пробирку с

транспортной средой. Затем рабочую часть цитощетки, содержащую исследуемый материал,

отрезают или обламывают и оставляют в пробирке с транспортной средой.

Соскоб эпителия с поверхности шейки матки (эктоцервикс) проводят второй цитощеткой.

Для этого слегка сгибают рабочую часть цитощетки и проводят ею по кругу по поверхности

эпителия зоны трансформации. Затем рабочую часть цитощетки, содержащую исследуемый

материал, отрезают или обламывают и оставляют в пробирке с транспортной средой.

Второй способ (используется комбинированная цитощетка)

Эпителий с поверхности шейки матки (эктоцервикса) и цервикального канала

(эндоцервикса) забирают одномоментно. Для этого, вначале удаляют слизь с поверхности

шейки матки стерильным тампоном, вводят зонд в цервикальный канал, прилагают небольшое

усилие, пока инструмент не коснется цервикального канала всей поверхностью. Медленно

делают по одному обороту в каждую сторону так, чтобы ворс зонда хорошо контактировал с

эпителием эндо- и экзоцервикса. Извлекают зонд, избегая касания стенок влагалища,

перемещают втулку на ручке инструмента так, чтобы зонд выпрямился, и помещают его в

пробирку с транспортной средой. Рабочая часть зонда, содержащая исследуемый материал,

отрезается или обламывается и оставляется в пробирке с транспортной средой.

Хранение материала: при t +2+8°С – в течение 48 часов.

Результаты и их интерпретация:

Тест дает возможность прогнозировать и проводить мониторинг течения вирусной

инфекции:

− Выявлять клинически малозначимую концентрацию вируса (менее 3lg на 105

клеток), что характеризуется минимальным риском развития дисплазии и почти в

100% случаев транзиторным течением вирусного процесса.

− Выявлять клинически значимую концентрацию вируса (более 3lg на 105 клеток), что

расценивается как наличие хронической инфекции с высоким риском развития

дисплазии и РШМ.

− Снижение вирусной нагрузки на 1 lg (в 10 раз) за 6 месяцев – инфекционный процесс

расценивается как транзиторная инфекция.

Предлагаемая методика позволяет нормировать количество вируса на количество

клеток человека, поэтому в качестве единицы измерения предлагается логарифм копий

ДНК ВПЧ на 105 эпителиальных клеток (lg/105 клеток).

Причины неадекватных образцов для исследования:

− перед забором эпителия не удалена слизь с поверхности шейки матки, и как следствие,

оставшаяся слизь заполнила рабочую часть цитощетки, препятствуя захвату на нее

эпителия;

− в полученном образце недостаточное количество эпителиальных клеток (например,

для забора материала использовали универсальный зонд);

− после забора материала цитощетку, содержащую эпителий, не оставили в пробирке с

транспортной средой взятый материал помещен в транспортную среду,

несоответствующую правилам забора.